Xaddiga nadiifinta borotiinka ee looga baahan yahay waxay ku xiran tahay isticmaalka dhamaadka loogu talagalay borotiinka.
Qaar ka mid ah codsiyada, wax soo saar caan ah ayaa ku filan. Si kastaba ha noqotee, isticmaalka kale, sida cuntooyinka iyo daawooyinka, heer sare oo nadiif ah ayaa loo baahan yahay. Si loo gaaro tan dhowr habab oo lagu nadiifiyo borotiinka ayaa sida caadiga ah loo adeegsadaa, taxane taxadar ah.
Talaabo kasta oo lagu nadiifiyo borotiinka ayaa badanaa keena waxoogaa sheyga waxyeellada ah. Sidaa daraadeed, istaraatejiyad daahirsan oo lagu nadiifiyo borotiinka waa mid ka mid ah heerka ugu sarreeya ee lagu nadiifiyo oo la gaaro tallaabooyinka ugu yar. Xulashada talaabooyinka la isticmaalo waxay ku xiran tahay xajmiga, lacag, xakameynta iyo sifooyinka kale ee borotiinka bartilmaameedka. Farsamooyinka soo socda ayaa ugu haboon in lagu nadiifiyo unugyada cytosolic-ka. Nadiifinta kombuyuutarrada cytosolic waa mid aad u adag oo caadi ahaan waxay u baahan tahay hababka kala duwan ee loo isticmaalo.
Tallaabooyinka ugu horeeya ee Nadiifinta Protein
Tallaabada ugu horreysa ee lagu nadiifiyo gudaha intracellular (gudaha gudaha unugyada) borotiinku waa diyaarinta wax soo saar cufan .
Kala saarida waxay ku jiri doontaa isku dhaf adag oo ka yimaada dhammaan borotiinada laga soo qaado cytoplasm, iyo macromolecules dheeraad ah, cofactors, iyo nafaqooyin. Soo saarida caanaha ah waxaa loo isticmaali karaa codsiyada qaarkood ee biotechnology, si kastaba ha noqotee, haddii daahirka uu yahay arrin, waa in la raaco talaabooyinka daahsoon.
Qaybaha borotiinka caanaha ah waxaa lagu diyaariyaa iyada oo la saarayo burburinta hannaanka gacanta ee lizis unugyada, taas oo lagu gaaro isticmaalka kiimikada iyo enzymes , sonication ama Press Press. Qashin-qubka ayaa la saaraa by santrentrugugation, iyo supernatant ayaa soo kabsaday. Diyaargarow adag oo ah borotiinka ka baxsan xayawaanka waxaa laga yaabaa in la helo iyadoo si fudud ay uga saarto unugyada by santrentrifugation.
Qaar ka mid ah codsiyada biotechnology qaarkood, waxaa jira dalab loogu talagalay enzymes- kareecada: Enzymes oo u dulqaadan kara heerkul sarreeya iyada oo aan lagu dhejin karin, iyo in la sii wado hawlo gaar ah. Noocyada abuura ee soo saara waxaa mararka qaarkood loo yaqaan 'extremophiles'. Nidaamka fudud ee lagu nadiifiyo borotiinka kuleylka kuleylka leh waa inuu u denbiyo borotiinka kale ee isku darka kuleylka, ka dibna qaboojinta xalka (sidaas darteed u oggolaanaya enzim-kicida oo dib-u-habeyn ama dib-u-furo, haddii loo baahdo.
Talaabooyinka Dhexdhexaadinta Dhexdhexaadinta
Waqtigii hore, talaabo labaad oo caadi ah oo lagu nadiifiyo borotiinka laga soo saaray khudradda cawska ayaa ahaa roobab xeeldheer oo leh xoojin sare oo osmotic ah (sida xal milixda). Nucleic acids ee laga soo saaro haanta qashin-saarka ayaa laga saari karaa qul-qulqulaya soo-saarka oo lagu sameeyay streptomycin sulfate ama protamine sulfate.
Barafka xayrta waxaa badanaa la sameeyaa iyadoo la adeegsanayo ammonium sulfate sida milixda.
Protein kala duwan ayaa ku wareegi doona qaddiyado kala duwan oo ah ammonium sulfate . Guud ahaan, borotiinada miisaanka molecular ka sarreeya ee qiyaasaha hoose ee ammonium sulfate. Cabbitaanka dufanku badanaa ma keenaan borotiin aad u sarreeya laakiin waxay kaa caawin kartaa in la tirtiro qaar ka mid ah borotiinka aan loo baahnayn ee isku dhafan iyo xoogga saarista saamiga. Saliidaha xalka ayaa markaa laga saarayaa sifeynta iyadoo loo marayo tuubo galboolka ah, sifeyn, ama jajab saarista galmada.
Hababka casriyeynta casriyeynta casriga ah ayaa badanaa ka faa'iideysta xirmooyinka baayacmushtariga ah oo badan oo bixiya xalalka diyaar u ah hababka caadiga ah. Nadiifinta protein waxaa badanaa la sameeyaa iyadoo la isticmaalayo filtarrada iyo walxaha la isku qurxiyo. Dhammaan wixii aad sameysid waa inay raacaan tilmaamaha oo ku dar mugga saxda ah ee saxda saxda ah oo sug waqtiga mudada cayiman intaad ururinayso dhajiyuhu (waxa ka soo baxaya dhamaadka kale ee dariiqa) ee tube tijaabo oo cusub.
- Qaababka Chromatographic waxaa lagu dabaqi karaa iyadoo la isticmaalayo tiirarka sarreeya ama qalab HPLC ah. Kala saaritaanka HPLC waxaa lagu sameyn karaa marxaladda dib-u-celinta, is-beddelka ama siyaabaha loo kala-saaro, iyo shaybaarka lagu ogaado habka diode ama farsamada casriga. I do not know
Baadhitaanka Xayawaanka iyo Qiimaynta Nadiifinta
- Kalasooc-shromatografi (RPC) ayaa kala soocaya borotiinka ku salaysan hoorofoogyadooda . Farsamadani waa mid aad u xulatay laakiin waxay u baahan tahay isticmaalka dareerayaasha dabiiciga ah. Qaar ka mid ah borotiinka ayaa si joogta ah loola dhaqmaa dareerayaasha waxayna waayi doonaan shaqeynta inta lagu jiro RPC. Sidaa daraadeed habkani kuma talin dhammaan codsiyada, gaar ahaan haddii ay lagama maarmaan u tahay borotiinka bartilmaameedka ah inuu hayo dhaqdhaqaaqa.
- Isticmaalka chromatography ee Ion-isweydaarsiga waxaa loola jeedaa kala-saarista borotiinka ku salaysan kharashka . Sumashooyinka waxaa loo diyaarin karaa iswaydaarsi isdaba-joog ah ama is-dhaafsiin. Iskujirta is-weydaarsiga waxaa ku jira marxalad adag oo leh ganaax haboon oo soo jiidata borotiinka aan si xun loo soo dayn. Kontoroolka isweydaarsiga 'Cittsts ' waa kuwa soo noqnoqda, dabeecadaha aan xuneyn ee lagu ganaaxo kaas oo soo jiidan kara borotiinka qumman. Cuncunka borotiinka bartilmaameedka ah (s) waxaa lagu sameeyaa iyadoo la badalayo pH ee ku jirta qaybta, taas oo keenta isbeddel ama dhexdhexaad ah kooxaha waxqabadka ah ee maskaxda oo dhan.
- Cunto-ka-saaris-cabbirid ah ( sifooyin gelid ) ayaa ka soocaya borotiinno ka sameysan kuwa yaryar taniyo maaddooyinka waaweyni ay u socdaan si dhakhso ah iyada oo loo marayo polymer iskudhafan oo ku yaala qaybta chromatography. Cunnooyinka waaweyni kuma haboon yihiin godadka polymer halka borotiinada yaryar ay sameeyaan, oo ay qaataan waqti dheer si ay ugu safraan dariiqa chromatography, iyaga oo maraya dariiqooda tooska ah. Eluate waxaa lagu uruuriyaa tuubooyin taxane ah oo kala soocaya borotiinka oo ku saleysan wakhti go'an. Saamaynta gel 'waa qalab wax ku ool ah oo lagu xoojinayo tijaabada borotiinka ka dib markii borotiinka bartilmaameedka la soo ururiyey mugga yar ee muraayada intii loo bilaabi lahaa midka hore. Farsamooyinka fayodhexaadinta oo la mid ah ayaa loo isticmaali karaa inta lagu jiro wax soo saarka borotiinka-weyn leh sababtoo ah qiimaha ay ku kacayaan
- Affinity chromatography waa farsamo aad u faa'iido badan oo loogu talagalay "dhoobo" ama dhamaystiraysa geeddi-nadiifinta borotiinka. Kuuska ku yaal qaybta "chromatography column" waxay isku xiran yihiin xirmooyinka si gaar ah ugu xidhan borotiinka bartilmaameedka. Borotiinka ayaa markaa ka dib laga soocayaa qulqulka adoo biyo raacinaya xalka oo ku jira lammaanaha bilaashka ah. Habkani wuxuu siiyaa natiijooyinka ugu sarreeya iyo waxqabadka ugu sarreeya marka loo eego farsamooyinka kale.
- SDS-PAGE waa polyacrylamide jel electrophoresis, oo lagu sameeyay joogitaanka SDS (sodium dodecyl sulfate) oo ku xirma borotiinka iyaga oo siinaya lacag aan fiicnayn oo net ah. Maadaama maadooyinka borotiinnada oo idil ay siman yihiin, qaabkani wuxuu ku kala gedisan yahay inta badan oo ku saleysan cabbirka. SDS-PAGE waxaa badanaa loo isticmaalaa si loo baadho nadiifinta borotiinka ka dib talaabo kasta oo taxane ah. Sida borotiinka aan loo baahneyn si tartiib tartiib ah ayaa looga soocaa isku dar ah, tirada qoryaha lagu sawiray jelka SDS-PAGE waa la yareeyey, ilaa ay ka jirto hal band oo matalaya borotiinka la doonayo.
- Immunoblotting waa qaab farsameed oo la taaban karo oo la adeegsanayo iyadoo lagu darayo jilicsanaanta chromatography. Daawooyinka ka hortagga borotiinka gaarka ah waxaa loo isticmaalaa sida loola jeedo tiirar jilicsan. Proteinada bartilmaameedka ah ayaa lagu hayaa qaybta, ka dibna la saaraa iyada oo la raaciyo tiirbaaxda leh milix cusbo ama walxo kale. Antibodies oo ku xiran shucaac ama sheybaarka caawimaadda ee lagu ogaanayo borotiinka bartilmaameedka ah marka laga reebo inta kale ee isku dhafan.
Ilaha:
Zubay G. 1988. Biochemistry, 2nd Edition. Macmillan Publishing Co., New York, NY, USA.
Amersham Pharmacia Biotech. 1999. Buug-gacmeedka Cabbitaanka "Protein Purification", Bisha Abriil. Amersham Pharmacia Biotech Inc. New Jersey, USA. http://www.biochem.uiowa.edu/donelson/Database%20items/protein_purification_handbook.pdf.