Buuntarkan waxaa loo isticmaalaa daaweynta electrophoresis ee DNA
Buufiska TBE wuxuu si gaar ah ugu faa'iidaystaa kala-soocidda qaybaha DNA-da ee yar yar (MW <1000), sida badeecooyinka yaryar ee xayiraadda enzim .
Qaaxada TBE waxay leedahay awood weyn oo waxtarka leh waxayna ku siin doontaa xal sax ah marka loo eego xarigga TAE . Bakhtiinta TAE waa xal ka kooban saldhigga Tris, acetic acid iyo EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE guud ahaan waa qaali ka badan taTE oo waxay horjoogsataa laydhka DNA, taas oo sababi karta dhibaatooyin haddii tallaabooyinka dambe ee nadiifinta DNA iyo tallaabooyinka tallaabooyinka loogu talagalay. Iyadoo saddexda talaabo ee fudud ee la socdo, baro sida loo sameeyo baqshiishada TBE. Waa inaysan qaadanin wax ka badan 30 daqiiqo si loo abuuro bakhshiintan. Halkan waa sida:
Diyaari Xalka Sayniska ee EDTA
Xalka EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) waa in la diyaariyaa kahor. EDTA uma tagi doonto gabi ahaanba ilaa xalinta pH ilaa 8.0. Qiyaas ahaan 500 milimitir stock stock of 0.5 M EDTA, miisaankeedu yahay 93.05 garaam oo cusbada EDTA diisma (FW = 372.2). Ka dibna ku shub 400 mililitir oo biyo gareeya isla markaana u beddel pH ee NaOH. Ka dib markaa, kor u xallinta xalka ugu dambeeya 500 millilitir.
Diyaarso Qalabka Kaydka ee TBE
Samee xeelad adag (5x) oo qashinka ah oo TBE ah miisaankeedu yahay 54 g Tris saldhig (FW = 121.14) iyo 27.5 g boric acid (FW = 61.83) iyo labadaba qiyaas ahaan 900 millilitir oo biyo ah. Ka dibna ku dar 20 millilitir oo ah 0.5 M EDTA (pH 8.0) iyo xallinta xalka mugga ugu dambeyn ee 1 litir.
Xalkan waxaa lagu keydin karaa heerkulka qolka laakiin jimicsi ayaa ka sameysan doona xal waayeel ah. Ku kaydi tuubbada dhalooyinka dhalada ah oo iska tuur haddii ay sameysey sameysey.
Diyaargaroobidda Xalka Qalitaanka TBE
Cudurka electrophoresis ee agarose, waxaa la isticmaali karaa qiyaasta qaaxada (TBE) waxaana lagu isticmaali karaa qiyaastii 0.5x (1:10 suuf ah). Ku dhaji milixda 10x biyo biyo ah. Isku-kalsoonida ugu dambeysa ee ku-saleysiga waa 45 mM Tris-borate iyo 1 mM EDTA. Bakhshiinka ayaa hadda diyaar u ah inuu isticmaalo jahwareer agarose ah .
Waxaad u Baahantahay
Si aad u sameysid TBE, waxaad u baahan doontaa afar waxyaalood oo keliya. Qalabka haray ee liistada lihi waa qalab. Afarta daroogo ee loo baahan yahay waa cusbada EDTA diisiyam, saldhigga Tris, boric acid iyo biyaha biyaha.
Sida qalabka, waxaad u baahan doontaa mitirka pH iyo heerarka kalibrida, sida ugu habboon. Intaas waxaa dheer, waxaad u baahan doontaa 600-milimitir iyo 1500 milliliter gaas ama shaag. Kala-soocida baahiyaha qalabkaaga waa qoob-ka-dhameeystayaasha qulqulaya iyo walaaqa baararka iyo walaaqa saxarada.
Hubi liistada shaybaarka aad isticmaali doonto si aad u hubiso inaad haysato wax kasta oo aad u baahan tahay ka hor intaanad bilaabin. Wax walbaa waa ka xun yahay in la joojiyo dhexda dhexe ee diyaarinta xalka sababtoo ah waxaad ka baxday qalabka saxda ah.
Haddii shaybaarkaagu uu joogo dugsiga ama goobta shaqada, ka hubi shaqaalaha saxda ah si ay u arkaan in ay haystaan dhammaan waxyaabaha ku jira kaydka. Taas ayaa ku badbaadin karta waqtiga iyo tamarta dhammaadka.